细胞养不好,考虑过支原体污染吗?

来源: 上海逍鹏生物科技有限公司   2019-10-17   访问量:1131评论(0)

培养细胞时,

发现细胞增殖变慢、
形态渐渐改变,
是血清或培养基的问题吗?
很有可能是你的细胞污染了~~~~~

 

支 原 体 污 染

 

细胞污染可分为细菌、霉菌、酵母菌、支原体污染,其中支原体污染发生的概率>50%。支原体(Mycoplasma) 是最小的原核生物,约0.1-0.3μm,可穿透0.22-0.45 μm 过滤膜 (BI血清经过3次0.1μm滤膜并且检测支原体)。

支原体污染棘手的原因之一是没有如其他污染源“立即可辨”的现象,支原体污染侵袭细胞但是并不一定致死。如果您的细胞出现如下状态:增殖变慢、形态变差、培养液变黄但是没有浑浊,说明您的细胞可能正遭受支原体的摧残!!

 


受支原体污染的293T                                    正常无污染的293T



支 原 体 检 测

怎么知道您的细胞正遭受支原体摧残呢,常见的检测方法几种:

1.分离培养法

将可疑样本接种到支原体培养基中,观察菌落生成。缺点:培养时间长,须3~5周才能判断。

2.DNA荧光染色法

利用荧光染剂 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 检测支原体污染,但若有些细胞易有荧光背景,可能会干扰结果判读。

3.PCR法

利用特异性引物,经PCR反应检测支原体DNA,灵敏且快速。

BI EZ-PCR支原体检测试剂盒:采用PCR法,简化了细胞培养中支原体污染的检测过程,可检测出细胞培养实验中常见的支原体污染。

 

试剂盒中包含独特的反应混合液,以及PCR中需要的所有试剂。使用者只需备有样品,最后产物跑完胶后,如有一个270bp的片段,则代表有支原体污染,整个检测过程耗时约4小时。





支 原 体 污 染 处 理
细胞培养常见的支原体污染为6种: 发酵支原体(M.fermentans),唾液支原体(M.salivarum),口腔支原体(M.orale),精氨酸支原体(M.arginini),猪鼻支原体(M.hyorhinis),莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)等,有些是动物来源,有些是人来源,支原体没有细胞壁,所以使用青霉素等破坏细胞壁类药物不具效用,建议使用专为支原体开发的处理试剂保护您珍贵的细胞。

支原体污染处理试剂:

BIOMYC-1 Antibiotic Solution 100X,货号:03-036-1B/C/D。

BIOMYC-2 Antibiotic Solution 100X,货号:03-037-1B/C/D。

BIOMYC-1 需BIOMYC-2按先后联合使用。

BIOMYC-3 Antibiotic Solution 100X,货号:03-038-1B/C/D。

上述处理试剂可去除90%以上实验室常见的支原体污染 (支原体非单一物种,无单一试剂能100%去除支原体污染),不具细胞毒性,方法非常便捷。

支 原 体 污 染 预 防

俗话说,预防胜于治疗,所以操作的器材与环境消毒也至关重要:

1.超净工作台预防

BI也提供Pharmacidal (货号: IC-110100)作为相应的处理试剂,Pharmacidal可有效预防真菌(和孢子),细菌(和孢子),支原体和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生长和污染。Pharmacidal成分为四苯甲基化合物,可生物降解,无毒,无刺激,对一般的工作台和器材表面没有任何损伤。不需稀释,每次使用超净工作台前或每天喷洒一次台面,二氧化碳培养箱每两周一次喷洒消毒,喷洒后让其自然风干,无需擦拭。



2.水盘为维持培养箱湿度所必需,但也成为潜在的污染源

BI的 Aquaguard-1 (货号: 01-867-1B 100ml, 稀释100倍使用) 消毒水盘效果非常好,而且不会腐蚀不锈钢,无毒,不挥发。

3.其他实验室的水浴环境也容易造成污染

BI的Aquaguard-2 (货号: 01-916-1E 50ml, 稀释500倍使用),可以有效消毒任何形式的水浴环境。



Anyway
科研路漫漫,
支原体君常相伴,
还是要做好预防和及时地检测,
给细胞安全的成长环境


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