血清沉淀,不必惊慌

来源: 上海逍鹏生物科技有限公司   2019-10-14   访问量:1082评论(0)

明明是一瓶优质的血清

偏偏出现沉淀

和血清质量有关吗?
会影响细胞培养吗?
如何避免沉淀?
出现沉淀如何处理?

希尔博士说:
“血清沉淀,其实属于常见现象,
并不会影响血清的品质,
大家不必惊慌!
但很多人对这一现象还不是很了解。”
为此,
我们对“血清沉淀”的几个常见问题进行了总结,
供广大科研青年参考。


血清沉淀是什么?
血清中经常会出现肉眼可见的沉淀,其成分有多种类型,产生的原因有很多,主要有纤维蛋白、磷酸钙还有一些其它成分。

1. 纤维蛋白(Fibrin)

血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中,血清采集、过滤(3 次 0.1 μm过滤)和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原(Fibrinogen)处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

下图是血清因反复冻融而造成纤维蛋白原的凝集

2. 磷酸钙(Calcium Phosphate)
这是一种常见的沉淀成分,通常会造成血清出现云雾状浑浊。当产品在 37℃保存时,这种现象尤其明显,在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动,常被误认为是微生物污染。
3. 其他成分(Other)
血清中的其他成分也会形成沉淀,例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等

 

血清沉淀会影响细胞培养吗?

1. 细胞生长
我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试,确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明,其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多客户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集,形成肉眼可见的沉淀。

2. 怀疑污染
磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下,当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时,常将其存放在 4℃冰箱中观察,并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多,反而会使血清更加浑浊,进而误以为存在血清污染。并且,在倒置显微镜下,可在血清中观察到四处游动的小黑点(磷酸钙颗粒的布朗运动),更容易使人误以为存在微生物污染。
为防止这类误解的产生,我们不建议客户培养血清来验证是否存在污染,而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养,以观察是否有细菌的增殖。并且,进行革兰氏染色,并在油镜(100 X 10 倍)下观察可直接确认是否存在微生物污染。

怎样操作可以尽量避免沉淀出现?
1. 正确解冻
首先,应按照逐步解冻的方式正确解冻血清:从-20℃取出后,置于 4℃冰箱缓慢解冻,最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或 37 ℃水浴解冻,则非常容易产生沉淀。在解冻过程中,请注意时不时缓慢摇晃瓶子,减少沉淀的产生。为避免反复冻融,建议您将血清分装使用。

2. 使用和保存注意事项
血清沉淀很难预测和避免,出现沉淀后也无需担忧,这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能:

1) 热灭活;
2) 37℃培养;
3) 反复冻融;
4) 伽马射线照射;
5) 2-8℃长期保存;
6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中(温度不稳定)。
血清沉淀的形成机理多种多样,具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象,这一点可以在各品牌官方网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。

 

出现血清沉淀该如何处理?
我们建议您采用2000 rpm 离心5分钟,取上清使用就好,比过滤方便,不需要另外准备滤心和针筒,又不容易污染。

总 结:
血清产品中出现沉淀属于常见现象,但不会影响血清的品质,对细胞培养而言也是没有任何问题的,大家可以放心使用!

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