深挖友康NK无血清培养基——细胞功能检测第二弹

​上期文章我们展示了使用友康纯因子无血清培养基培养出的NK细胞对K562的杀伤能力。实验结果表明，当以0.5:1, 1:1, and 2:1的效靶比混入NK细胞孵育4h后，K562细胞的杀伤数分别为2.53E+04、2.99E+04、3.91E+04，杀伤率分别为51%、60%、78%。

可见经友康体系培养的NK细胞具备正常且有效的对K562细胞杀伤效果。

此外，NK细胞的杀伤效果也可通过NK细胞脱颗粒能力，即CD107a的表达来检测。NK细胞被称为大颗粒淋巴细胞，其胞浆内含有高浓度以囊泡形式存在的细胞毒性颗粒，如穿孔素、颗粒酶等。溶酶体相关膜蛋白-1 CD107为细胞脱颗粒的标志物，在MHC缺失靶点的刺激下，CD107a的表达与NK细胞介导的靶细胞裂解相关，CD107a的阳性率应当有显著上调。

此外，除了在几乎所有分泌细胞因子的细胞上协同表达外，CD107a也在刺激后不分泌细胞因子的大部分NK细胞上表达。这些数据表明，使用CD107a作为NK细胞功能活性的标志物，可以代表具有杀伤活性的NK细胞。

检测步骤

1. K562细胞离心后，用不含有IL-2和血浆的NK培养基重悬细胞，每孔种2E4个细胞。

2. NK细胞离心后，用不含有IL-2和血浆的NK培养基重悬细胞，按照E:T为2.5：1、1：1分别每孔添加相应量的NK细胞。

3. 分别在2H和4H的时候进行荧光显微镜拍照、流式检测CD107a的表达量

NK细胞毒性的计算方法=加靶细胞刺激的 CD107a 阳性率(%)-CD107a自发表达率 (%)

检测结果

1：镜下观察

2：流式检测

样本一：孵育2h

样本二：孵育4h

实验结论

在不同的效靶比下，CD107a均能够正常表达。随着NK与K562细胞孵育时间的延长，CD107a的表达量有明显上调。可见友康体系培养的NK细胞有正常且有效的脱颗粒能力。